mRNA疫苗是將編碼疾病特異性抗原的mRNA引入體內(nèi)，利用宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成機(jī)制產(chǎn)生抗原，從而觸發(fā)免疫應(yīng)答。通?？筛鶕?jù)不同疾病構(gòu)建特異性抗原的mRNA序列，由新型脂質(zhì)納米載體顆粒包裹運(yùn)送至細(xì)胞內(nèi)，再利用人體核糖體翻譯mRNA序列產(chǎn)生疾病的抗原蛋白，分泌后被自身免疫系統(tǒng)識別產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而達(dá)到預(yù)防疾病作用面對新冠病毒疫情的持續(xù)，其工作原理如下圖：

隨著COVID-19的全球流行，各國傾力研究用于阻遏新冠流行的疫苗。mRNA疫苗在作為一種新型疫苗，在新冠疫情來臨時發(fā)揮了排頭兵的作用。隨著技術(shù)的發(fā)展，近些年來，mRNA技術(shù)也在腫瘤治療領(lǐng)域發(fā)揮出了非常不錯的治療效果。攻克實(shí)體瘤，是CAR-T細(xì)胞療法未來發(fā)展的重要方向，而mRNA技術(shù)就是強(qiáng)有力的助力之一

本文提供了均相技術(shù)在mRNA疫苗研發(fā)中一些解決方案，包括有測dsRNA殘留、測DNA殘留以及測中和抗體判斷藥效等。

一、檢測dsRNA殘留

該試劑盒基于HTRF?技術(shù)（均相時間分辨熒光）用于細(xì)胞裂解液中病毒雙鏈RNA(dsRNA)的簡單快速定量，并提供了定量PCR(qPCR)的簡單替代方法。

HTRF dsRNA檢測原理

使用Eu（熒光能量供體）標(biāo)記的抗dsRNA抗體和d2（受體）標(biāo)記的抗dsRNA抗體，采用夾心法檢測dsRNA。熒光能量供體和受體因dsRNA相互接近時，用光源（激光或閃光燈）激發(fā)供體，觸發(fā)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，進(jìn)而在特定波長(665nm)發(fā)出熒光信號。信號強(qiáng)度與dsRNA的濃度成正比。

HTRF技術(shù)優(yōu)勢

①操作簡單：空板加樣，無需洗板和包被；

②節(jié)省樣本：僅需10μl；

③靈敏度高，實(shí)驗(yàn)背景低；

④通量高：適合96/384/1536孔板。

操作流程

兩步法：首先空板中加入10μl樣本，再加入檢測試劑各5μl，孵育過夜即可使用酶標(biāo)儀讀板。

HTRF dsRNA檢測試劑盒

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

64RNAPEG

Viral dsRNA detection Kit

500 tests

64RNAPEH

10,000 tests

二、測中和抗體判斷藥效

1、Luminescence Assays

螢火蟲熒光素酶（Luciferase）在含有鎂離子的情況下，可催化熒光素與ATP反應(yīng)生成熒光素-AMP（中間體）和焦磷酸（PPi）。然后催化中間體氧化生成AMP、CO2和激發(fā)態(tài)的氧化熒光素。激發(fā)態(tài)的氧化熒光素在返回基態(tài)時發(fā)射出光。Luciferase的發(fā)光反應(yīng)不需要額外的激發(fā)光，只要Luciferase和底物接觸就能產(chǎn)生熒光，發(fā)出的光子可以被光敏感元件測到，避免了因背景物質(zhì)被激發(fā)而產(chǎn)生的背景熒光干擾。

將報(bào)告基因嵌入病毒，病毒侵染宿主細(xì)胞后可以檢測到發(fā)光信號，加入中和抗體與病毒結(jié)合可阻斷病毒侵入宿主細(xì)胞，發(fā)光強(qiáng)度就會減弱，以此判斷中和抗體藥效。

PerkinElmer Luminescence產(chǎn)品優(yōu)勢

①操作簡單，靈敏度高；

②常溫2-8℃運(yùn)輸，4℃儲存；

③不含DTT。

操作流程

復(fù)溶buffer加入凍干底物中充分混勻5min，等量加入細(xì)胞中孵育10-20min即可讀板。靈敏度和半衰期結(jié)果如下圖。

（中檢院有關(guān)新冠中和抗體活性評價的研究，就是這一款Britelite plus試劑盒）

britelite plus

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

6066766

britelite plus

10 mL

6066761

100 mL

6066769

1,000 mL

新冠病毒SARS-CoV-2 S1/ACE2抗體研發(fā)中HTRF和AlphaLISA技術(shù)有相關(guān)成品檢測試劑盒均可提供。

2、HTRF?SARS-CoV-2 S1/ACE2 Assay

HTRF ?S1/ACE2結(jié)合試劑盒用于測量S1和ACE2之間的相互作用。利用HTRF（均相時間分辨熒光）技術(shù)，該檢測方法能夠?qū)崿F(xiàn)：高通量、簡單、快速地篩選化合物和抑制劑。

ACE2用Eu（HTRF供體）標(biāo)記，S1用d2(HTRF受體)標(biāo)記。當(dāng)供體和受體因S1和ACE2結(jié)合而接近時，供體的激發(fā)觸發(fā)向受體的熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，受體在665nm處發(fā)射信號。這種特定的信號與S1/ACE2相互作用的程度成正比。因此，化合物或抗體阻斷S1/ACE2的相互作用會導(dǎo)致HTRF信號的下降。

HTRF S1/ACE2檢測試劑盒

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

64BDS1PEG

S1/ACE2 BINDING ASSAY KITS

500 tests

64BDS1PEH

10,000 tests

3、SARS-CoV-2 S1/ACE2 AlphaLISA Assay

涂有鏈霉親和素的供體微珠捕獲生物素化S1蛋白，受體微珠偶聯(lián)人ACE2蛋白。供體微珠和受體微珠通過S1與ACE2結(jié)合而接近。在680nm激光照射下，供體微珠上的光敏劑將周圍環(huán)境中的氧轉(zhuǎn)換為單線態(tài)氧擴(kuò)散到受體微珠后，引起化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生615nm信號。該分析有助于篩選S1/ACE2結(jié)合抑制劑。

AlphaLISA技術(shù)優(yōu)勢

①操作簡單：無需洗板和包被；

②靈敏度高，線性范圍寬：化學(xué)發(fā)光和微珠的級聯(lián)放大效應(yīng)；

③實(shí)驗(yàn)背景低。

AlphaLISA S1/ACE2檢測試劑盒

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

AL3146 C

SARS-CoV-2 S1/ACE2 Binding AlphaLISA kit

500 Assay

AL3146 F

5000 Assay

三、DNA殘留檢測

LANCE是TR-FRET（時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移）均相技術(shù)。具備均相技術(shù)的優(yōu)勢，全程無需洗滌和分離，用于分析檢測和定量緩沖溶液和細(xì)胞培養(yǎng)基中的DNA污染物。

用Eu標(biāo)記抗DNA抗體（供體）和用ULight標(biāo)記的抗DNA抗體（受體）。供體和受體相互靠近，在320或340nm激發(fā)時，觸發(fā)熒光共振能量轉(zhuǎn)移，受體發(fā)出665nm熒光波長。信號強(qiáng)度與形成的抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量成正比。

AlphaLISA仍然是基于微珠的化學(xué)發(fā)光均相檢測

LANCE Ultra DNADetection Kit

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

TRF1331C

Host Cell Residual DNA contamination

500 Assay

TRF1331M

LANCE Ultra TR-FRET Detection Kit

10,000 Assay

AlphaLISA DNA Detection Kit

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

AL331HV

Host Cell Residual DNA AlphaLISA

100 Assay

AL331C

Detection Kit

500 Assay

AL331F

5000 Assay

優(yōu)寧維提供mRNA研發(fā)中各階段相關(guān)產(chǎn)品如下：