mRNA疫苗是將編碼疾病特異性抗原的mRNA引入體內(nèi)，利用宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成機(jī)制產(chǎn)生抗原，從而觸發(fā)免疫應(yīng)答。通?？筛鶕?jù)不同疾病構(gòu)建特異性抗原的mRNA序列，由新型脂質(zhì)納米載體顆粒包裹運(yùn)送至細(xì)胞內(nèi)，再利用人體核糖體翻譯mRNA序列產(chǎn)生疾病的抗原蛋白，分泌后被自身免疫系統(tǒng)識(shí)別產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而達(dá)到預(yù)防疾病作用面對(duì)新冠病毒疫情的持續(xù)，其工作原理如下圖：
隨著COVID-19的全球流行，各國傾力研究用于阻遏新冠流行的疫苗。mRNA疫苗在作為一種新型疫苗，在新冠疫情來臨時(shí)發(fā)揮了排頭兵的作用。隨著技術(shù)的發(fā)展，近些年來，mRNA技術(shù)也在腫瘤治療領(lǐng)域發(fā)揮出了非常不錯(cuò)的治療效果。攻克實(shí)體瘤，是CAR-T細(xì)胞療法未來發(fā)展的重要方向，而mRNA技術(shù)就是強(qiáng)有力的助力之一
本文提供了均相技術(shù)在mRNA疫苗研發(fā)中一些解決方案，包括有測(cè)dsRNA殘留、測(cè)DNA殘留以及測(cè)中和抗體判斷藥效等。
一、檢測(cè)dsRNA殘留
該試劑盒基于HTRF?技術(shù)（均相時(shí)間分辨熒光）用于細(xì)胞裂解液中病毒雙鏈RNA(dsRNA)的簡單快速定量，并提供了定量PCR(qPCR)的簡單替代方法。
HTRF dsRNA檢測(cè)原理
使用Eu（熒光能量供體）標(biāo)記的抗dsRNA抗體和d2（受體）標(biāo)記的抗dsRNA抗體，采用夾心法檢測(cè)dsRNA。熒光能量供體和受體因dsRNA相互接近時(shí)，用光源（激光或閃光燈）激發(fā)供體，觸發(fā)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，進(jìn)而在特定波長(665nm)發(fā)出熒光信號(hào)。信號(hào)強(qiáng)度與dsRNA的濃度成正比。
HTRF技術(shù)優(yōu)勢(shì)
①操作簡單：空板加樣，無需洗板和包被；
②節(jié)省樣本：僅需10μl；
③靈敏度高，實(shí)驗(yàn)背景低；
④通量高：適合96/384/1536孔板。
操作流程
兩步法：首先空板中加入10μl樣本，再加入檢測(cè)試劑各5μl，孵育過夜即可使用酶標(biāo)儀讀板。
HTRF dsRNA檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
64RNAPEG
Viral dsRNA detection Kit
500 tests
64RNAPEH
10,000 tests
二、測(cè)中和抗體判斷藥效
1、Luminescence Assays
螢火蟲熒光素酶（Luciferase）在含有鎂離子的情況下，可催化熒光素與ATP反應(yīng)生成熒光素-AMP（中間體）和焦磷酸（PPi）。然后催化中間體氧化生成AMP、CO2和激發(fā)態(tài)的氧化熒光素。激發(fā)態(tài)的氧化熒光素在返回基態(tài)時(shí)發(fā)射出光。Luciferase的發(fā)光反應(yīng)不需要額外的激發(fā)光，只要Luciferase和底物接觸就能產(chǎn)生熒光，發(fā)出的光子可以被光敏感元件測(cè)到，避免了因背景物質(zhì)被激發(fā)而產(chǎn)生的背景熒光干擾。
將報(bào)告基因嵌入病毒，病毒侵染宿主細(xì)胞后可以檢測(cè)到發(fā)光信號(hào)，加入中和抗體與病毒結(jié)合可阻斷病毒侵入宿主細(xì)胞，發(fā)光強(qiáng)度就會(huì)減弱，以此判斷中和抗體藥效。
PerkinElmer Luminescence產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
①操作簡單，靈敏度高；
②常溫2-8℃運(yùn)輸，4℃儲(chǔ)存；
③不含DTT。
操作流程
復(fù)溶buffer加入凍干底物中充分混勻5min，等量加入細(xì)胞中孵育10-20min即可讀板。靈敏度和半衰期結(jié)果如下圖。
（中檢院有關(guān)新冠中和抗體活性評(píng)價(jià)的研究，就是這一款Britelite plus試劑盒）
britelite plus
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
6066766
britelite plus
10 mL
6066761
100 mL
6066769
1,000 mL
新冠病毒SARS-CoV-2 S1/ACE2抗體研發(fā)中HTRF和AlphaLISA技術(shù)有相關(guān)成品檢測(cè)試劑盒均可提供。
2、HTRF?SARS-CoV-2 S1/ACE2 Assay
HTRF ?S1/ACE2結(jié)合試劑盒用于測(cè)量S1和ACE2之間的相互作用。利用HTRF（均相時(shí)間分辨熒光）技術(shù)，該檢測(cè)方法能夠?qū)崿F(xiàn)：高通量、簡單、快速地篩選化合物和抑制劑。
ACE2用Eu（HTRF供體）標(biāo)記，S1用d2(HTRF受體)標(biāo)記。當(dāng)供體和受體因S1和ACE2結(jié)合而接近時(shí)，供體的激發(fā)觸發(fā)向受體的熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，受體在665nm處發(fā)射信號(hào)。這種特定的信號(hào)與S1/ACE2相互作用的程度成正比。因此，化合物或抗體阻斷S1/ACE2的相互作用會(huì)導(dǎo)致HTRF信號(hào)的下降。
HTRF S1/ACE2檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
64BDS1PEG
S1/ACE2 BINDING ASSAY KITS
500 tests
64BDS1PEH
10,000 tests
3、SARS-CoV-2 S1/ACE2 AlphaLISA Assay
涂有鏈霉親和素的供體微珠捕獲生物素化S1蛋白，受體微珠偶聯(lián)人ACE2蛋白。供體微珠和受體微珠通過S1與ACE2結(jié)合而接近。在680nm激光照射下，供體微珠上的光敏劑將周圍環(huán)境中的氧轉(zhuǎn)換為單線態(tài)氧擴(kuò)散到受體微珠后，引起化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生615nm信號(hào)。該分析有助于篩選S1/ACE2結(jié)合抑制劑。
AlphaLISA技術(shù)優(yōu)勢(shì)
①操作簡單：無需洗板和包被；
②靈敏度高，線性范圍寬：化學(xué)發(fā)光和微珠的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)；
③實(shí)驗(yàn)背景低。
AlphaLISA S1/ACE2檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
AL3146 C
SARS-CoV-2 S1/ACE2 Binding AlphaLISA kit
500 Assay
AL3146 F
5000 Assay
三、DNA殘留檢測(cè)
LANCE是TR-FRET（時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移）均相技術(shù)。具備均相技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，全程無需洗滌和分離，用于分析檢測(cè)和定量緩沖溶液和細(xì)胞培養(yǎng)基中的DNA污染物。
用Eu標(biāo)記抗DNA抗體（供體）和用ULight標(biāo)記的抗DNA抗體（受體）。供體和受體相互靠近，在320或340nm激發(fā)時(shí)，觸發(fā)熒光共振能量轉(zhuǎn)移，受體發(fā)出665nm熒光波長。信號(hào)強(qiáng)度與形成的抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量成正比。
AlphaLISA仍然是基于微珠的化學(xué)發(fā)光均相檢測(cè)
LANCE Ultra DNADetection Kit
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
TRF1331C
Host Cell Residual DNA contamination
500 Assay
TRF1331M
LANCE Ultra TR-FRET Detection Kit
10,000 Assay
AlphaLISA DNA Detection Kit
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
AL331HV
Host Cell Residual DNA AlphaLISA
100 Assay
AL331C
Detection Kit
500 Assay
AL331F
5000 Assay
優(yōu)寧維提供mRNA研發(fā)中各階段相關(guān)產(chǎn)品如下：
